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上海酶联生物冻存的原代细胞应该如何培养
更新时间:2024-9-21   点【diǎn】击【jī】次数:1284次

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原【yuán】代细【xì】胞是指从机体取【qǔ】出后立即【jí】培养的【de】细【xì】胞。有人把培养【yǎng】的第【dì】1代细胞与传【chuán】10代以内【nèi】的细胞统【tǒng】称为原代【dài】细胞培养。原代细【xì】胞不仅广泛应【yīng】用于分子、细胞生物【wù】学和生物医学【xué】基础研究,如蛋白质组【zǔ】学、基因【yīn】组学、细【xì】胞株(系)研究、DNA,RNA和遗传学研究等。637882313850089198632.jpg
一、冻存原代细胞的培养

 1.将一管细胞从液氮罐中取出,注意保护手和眼睛。

 2.将冻【dòng】存管快【kuài】速的放入37℃水浴中,轻轻握【wò】住并【bìng】旋转,直到管内物体*融【róng】化【huà】。

 3.将冻【dòng】存管立即从水浴中拿【ná】出,擦【cā】干,转入无菌环【huán】境。

 4.用70%的酒精冲洗冻存管,然后擦去多余酒精。

 5.打开【kāi】盖【gài】子,注意手指【zhǐ】不要碰到里面的螺纹(注意,由于冻存管【guǎn】有负【fù】压【yā】,开【kāi】盖时可能会【huì】有少【shǎo】量溢出,这是正常【cháng】现象)。

 6.用多聚【jù】赖氨酸【suān】包被培【péi】养瓶。多数细【xì】胞推荐【jiàn】的接种密度为每平方厘米5000个【gè】细胞【bāo】。

 7.盖好培养瓶的盖子,轻轻【qīng】摇【yáo】晃【huǎng】培养瓶【píng】以使【shǐ】细胞分布【bù】均匀。若需【xū】要气体交换可【kě】打开盖子。

 8.将培养瓶放入培养箱中。

 9.放入培养箱【xiāng】后第9-21小时更换一【yī】次【cì】培养基,以去除残【cán】留的二甲基亚枫【fēng】和未【wèi】贴壁的细【xì】胞。 

 二、原代细胞的组织块培养法:

 1.组【zǔ】织块【kuài】接种后的前3天,在观察和移动的过程中,注意不要引起【qǐ】液【yè】体的【de】振荡。要避免经常翻动和振【zhèn】动,否则组织块不易附着于瓶壁上【shàng】或附着后【hòu】也会脱落【luò】飘起。

 2.加【jiā】入的培养【yǎng】液不宜过【guò】多,避免浸泡的组织【zhī】块受轻微的波动而【ér】脱落【luò】下来。

 3.当细胞向外迁徙出来【lái】后【hòu】要注【zhù】意【yì】记录并去除漂浮的组【zǔ】织【zhī】块和残留的细【xì】胞【bāo】,它们产生的有毒【dú】物质会影【yǐng】响原代细胞的生长。

 4.为促【cù】进组织【zhī】块尽快粘贴【tiē】在【zài】培养瓶皿上,可以【yǐ】在【zài】种植【zhí】前先将胶原薄层涂在培【péi】养瓶底壁上。

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