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上海酶联生物细胞培养需要哪些环境因素
更新时【shí】间:2024-9-22   点击【jī】次数:821次【cì】

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1.无菌环境

无毒和无菌是体外培养细胞的【de】首要条件。细【xì】胞在活体内,解【jiě】毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵,但细胞在体外培养的过【guò】程中,缺【quē】乏机【jī】体免疫【yì】系【xì】统【tǒng】的保护而丧【sàng】失对微【wēi】生物【wù】的防【fáng】御能力和对有【yǒu】害物质的【de】解【jiě】毒能力。为保证细胞能在体【tǐ】外环境【jìng】中生长繁殖,必须要确【què】保无【wú】菌工作区域【yù】、良好的个人卫生【shēng】、无菌试剂【jì】和培养【yǎng】基以及无【wú】菌操作。

常【cháng】见的微生物污染有支原体、细菌【jun1】、真菌【jun1】。支原体无致【zhì】死毒性,可与细胞长期共存【cún】,对细胞有潜在影响【xiǎng】,但体积小【xiǎo】,不易鉴别【bié】,可【kě】借助于【yú】地衣红或【huò】Hoechst33342染色来进行检测。细菌【jun1】增殖【zhí】快,在短时间【jiān】内即【jí】可大量扩增,并产生【shēng】毒素杀死细胞。真菌的种【zhǒng】类繁多,肉【ròu】眼可见,漂浮于培养液面上,可呈丝状、管状或【huò】树【shù】枝状等【děng】。

2.合适的温度

一般哺【bǔ】乳【rǔ】类与禽类细胞在体外培养的适宜温【wēn】度【dù】是37~38℃,不适宜的环境温度会影响【xiǎng】细胞【bāo】的生长【zhǎng】。细胞【bāo】对【duì】低【dī】温的【de】耐受能力要强【qiáng】于【yú】对高【gāo】温【wēn】的耐受能力【lì】,在低温下,细胞的【de】代谢活【huó】力及核分裂能力降低。若温度不低于0℃,虽【suī】然细胞代谢受到影响,但【dàn】无损伤作【zuò】用;25~35℃时,细胞以缓慢的速度生长;但若被置于40℃数小时,则不仅不利于细【xì】胞【bāo】生存、生长,甚【shèn】至可导致其死亡【wáng】。

3.气体环境与pH

细胞【bāo】的体外培养【yǎng】需要理想的气体环境【jìng】,氧气、二氧化碳是细【xì】胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸【suān】循环,为细【xì】胞生存、代谢【xiè】与【yǔ】合成提供能量;二【èr】氧化碳既【jì】是细胞的【de】代谢产【chǎn】物,是细胞【bāo】生长的必需成分,又与维持培养液的pH有关【guān】。大多数【shù】细【xì】胞适宜的pH范围往【wǎng】往是7.2~7.4。在开放式培【péi】养中【zhōng】,以5%的二【èr】氧化碳气体比【bǐ】例为宜。 

4.适宜的渗透压

高【gāo】渗溶液或低渗溶液会【huì】引起细【xì】胞发生褶皱、肿胀【zhàng】、破裂。因此,渗透【tòu】压是体【tǐ】外培养细【xì】胞的重【chóng】要条件【jiàn】之一。多数体外培【péi】养的细【xì】胞对渗【shèn】透【tòu】压都有一定的耐受能力,实际应【yīng】用中,260~320mmol/L的渗透压可适用于大【dà】多数细胞。


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