很【hěn】多试剂检查都涉及【jí】到规【guī】范【fàn】曲【qǔ】线的疑【yí】问，ELISA试剂盒规范【fàn】曲线做的好【hǎo】与坏会直【zhí】接影响到试验的成果，乃【nǎi】至关系到试验的成【chéng】败，那么究竟怎么绘制或规范曲线呢【ne】？

一、做规范曲线样品检查时有几个疑问需要注意

1、样品的浓度等目标【biāo】是【shì】依据规范曲【qǔ】线计【jì】算出来的，所以首先要把【bǎ】做规范曲线看作是【shì】比做正式试【shì】验还要主要的一件事，不然【rán】后边的【de】试验成果无从谈起【qǐ】。

2、设置规范【fàn】曲线样【yàng】品的规范浓度规【guī】模要有【yǒu】一个对比大的跨度，而且要能【néng】包括你所【suǒ】要检查试验样【yàng】品的浓度，即样品【pǐn】的浓度要在规范【fàn】曲线浓度规模以内，人ELISA试剂盒【hé】包【bāo】括上【shàng】限和下限。而对于呈S型的【de】规范【fàn】曲线，尽量【liàng】要使试验样品的浓度【dù】在【zài】中心斜度陡段【duàn】，即曲线简直【zhí】成直线的规模内【nèi】。

3、选用倍比稀【xī】释【shì】法规范曲线中的规【guī】范样【yàng】品浓度，这么就能够确【què】保规范样品的【de】浓度不【bú】会出现【xiàn】较大的违背。

4、检查规范样品时，应按浓度【dù】递加顺【shùn】序【xù】进行，以削【xuē】减【jiǎn】高浓度对低浓度的【de】影【yǐng】响。

5、规范曲线的样品数通常为7个点，但少要确保有5个点。

6、做出【chū】的规【guī】范曲线相数因试验要求不【bú】一【yī】样而【ér】有所【suǒ】变化，但通常来说，相【xiàng】数R少要大于0.98，对于有【yǒu】些试【shì】验，少要0.99乃至是0.999.

二、ELISA试剂盒挑选啥方程去拟合

在【zài】S曲线【xiàn】的【de】低浓度部【bù】分能够用乘幂方程的【de】拟【nǐ】合，中低浓度部分能够用直线方程，中心【xīn】部分可【kě】用对【duì】数方程，而中后段可用【yòng】四【sì】参数【shù】。免疫检查时标准点（能【néng】够【gòu】是倍比稀释的【de】，也能够【gòu】不是）浓度假设和相应的吸光度（OD）值假【jiǎ】设能够出现直线当然是抱【bào】负的了，这时能【néng】够经过EXELL等利便的取得【dé】拟合曲线，进而【ér】推算【suàn】出样品的浓度【dù】值【zhí】。 

对于标准曲线【xiàn】的拟合办法，直线、二次曲线、三次曲【qǔ】线【xiàn】、指数【shù】、对数等虽都【dōu】可用于ELISA及其它【tā】生物学反响中的【de】曲【qǔ】线【xiàn】拟合，但都只合用于【yú】曲线【xiàn】的一【yī】部【bù】分，有的合用于前半段，有的合用于后半【bàn】段，有的合用于【yú】中心一段【duàn】，而Logistic曲线则对曲【qǔ】线的悉【xī】数都有【yǒu】较好的合用性。在一个长的区间内，Logistic应当都能拟合【hé】得较为抱【bào】负【fù】。假【jiǎ】设用来【lái】定量，S形【xíng】曲线的中心【xīn】段（较陡处）是对比好的，而两真个平整【zhěng】部分【fèn】计算误差会大，有【yǒu】时【shí】乃至会【huì】很大【dà】。用于免疫检查的所谓“标准曲线"真实称为【wéi】拟合曲线对【duì】比适宜。现在国际上盛行的免【miǎn】疫【yì】检查拟合办法是“四【sì】参数逻辑拟合【hé】"，用这【zhè】种拟合办法通【tōng】常能够对比的反映浓度和吸【xī】光度的曲线，从【cóng】而进一步对比【bǐ】的取得样品中待测物质的浓度值。但咱们做免疫检查很少有时候【hòu】能够【gòu】有这么抱负的【de】情况，标【biāo】品浓度和【hé】相应OD值【zhí】通常是【shì】"S"型的曲线，这时就不能用直线拟合【hé】的办法了，而对【duì】拟【nǐ】合【hé】办法进【jìn】行挑选即【jí】是必要的了。

枢纽在于【yú】你的标准曲线做到【dào】了【le】S形【xíng】的哪一部分，你想检查的样品浓度在曲线的【de】哪【nǎ】一部分【fèn】。当【dāng】然【rán】，假设用于定【dìng】量，仍是在【zài】中心一段较好。但建【jiàn】模型是一回事，而用它【tā】来定量【liàng】是另一回事【shì】。这些办法当【dāng】然没【méi】有一种办法【fǎ】能够通【tōng】用，但也都能够用。但并【bìng】不是说【shuō】它即是的。事实【shí】上不仅是ELISA，其它良多生物【wù】学【xué】反响都是【shì】S形曲线，也都能够用Logistic曲线拟【nǐ】合。

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