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你知道Elisa试剂盒样品进行如何正确稀释吗
更新时【shí】间:2024-9-21   点击【jī】次数:1829次

Elisa试剂盒采用双抗【kàng】体【tǐ】一【yī】步夹心法酶联免疫吸附试验【yàn】。计算方法是以【yǐ】标准物的浓度为横坐标,OD值为纵【zòng】坐标,在半对数坐标纸上绘出【chū】标准【zhǔn】曲线,根据样品的OD值【zhí】由标【biāo】准【zhǔn】曲线【xiàn】查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或【huò】用【yòng】标准【zhǔn】物的【de】浓度与OD值计算出标准曲线的直【zhí】线回归方程式,将样品【pǐn】的OD值代入【rù】方程式,计算出样品浓【nóng】度【dù】,再乘以稀释倍数【shù】,即为样品的实际【jì】浓【nóng】度。


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Elisa试剂盒【hé】在没有去离【lí】子水或双蒸水时,可以使用【yòng】纯净【jìng】水配制【zhì】溶液【yè】,切勿使用自来水。

1.样品稀释:酶联免疫反应【yīng】是一种敏【mǐn】感性很高【gāo】的反应,如果血清【qīng】不稀释,不【bú】可避免会产生很【hěn】强的非特异性【xìng】反应【yīng】,出现假阳性。因此【cǐ】,国外检测血清【qīng】抗体的试剂盒,均规定将血清稀释至适【shì】当的倍数,以降低非【fēi】特【tè】异性【xìng】反应,使【shǐ】特异性的抗原【yuán】抗体反应充分体现出【chū】来。样【yàng】品稀释倍数均通过大量试【shì】验确定,以保证试验【yàn】的灵敏度【dù】和特异性【xìng】。但是,有些【xiē】用户未能严格按【àn】使用说【shuō】明书操作,如产品应【yīng】取10u1样品进【jìn】行【háng】稀释,个别【bié】用户取【qǔ】5u1甚至1u1样品进【jìn】行【háng】稀释,由于吸嘴上不可避免地沾有样【yàng】品以及微量移液器【qì】的精度不够,因此造成样品稀【xī】释倍数【shù】不准【zhǔn】确,检测结【jié】果出现【xiàn】问题。


2.试剂【jì】盒【hé】平衡【héng】:试剂盒中所有试剂【jì】和板【bǎn】条均应在试验前平衡至室温【wēn】(约25℃),一般需在室温【wēn】放置20~30分钟以上【shàng】。平衡时【shí】间太【tài】短【duǎn】会造成试【shì】剂混匀不够【gòu】,样【yàng】品孵育时间【jiān】相【xiàng】对【duì】缩短,ELISA反【fǎn】应不够充分。冬季室温低,可将试【shì】剂盒打开盒【hé】盖置37℃温【wēn】箱20分钟【zhōng】。稀释【shì】前、后的样品需要充分混匀,所有试剂在加样前也须摇匀,以保证【zhèng】试验的均一性。

 

3.加样:尽【jìn】量操作规【guī】范,将液【yè】体垂【chuí】直【zhí】悬空快速加入【rù】到微【wēi】孔板中,避免加到孔【kǒng】避上。加完试剂后【hòu】用【yòng】手适当振荡或在桌【zhuō】面适当作圆周运动,使孔内试剂充分【fèn】混【hún】匀,盖好盖板【bǎn】膜。

 

4.洗板:洗液尽量不要溢【yì】出孔外;加洗液【yè】后要静置10-15s,甩去板孔中洗液后,一定要用力拍干【gàn】;及时更【gèng】换【huàn】吸水纸,尤其【qí】是拍过酶标记物【wù】的吸水纸一定要弃【qì】去【qù】,否则可能【néng】影【yǐng】响试验结果【guǒ】。


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以上是Elisa试剂盒样品进行如何正确稀释你知道吗?

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