一、实验目的

植物【wù】细【xì】胞和组织培养的【de】技术性强，要【yào】求无菌操作，通过本实验【yàn】可初【chū】步掌握常规的组织培养技术，加【jiā】深对无菌【jun1】操作的了解【jiě】。

二、实验原理

植物的性：植物体的任【rèn】何一【yī】个细胞都具【jù】有生长分化成【chéng】为一个【gè】完整植【zhí】株的能【néng】力，称为植物的性【xìng】。

植物组织培养就是利【lì】用植物的性进行离体无菌【jun1】植物【wù】培【péi】养的【de】一门技术【shù】。植物组织培养【yǎng】按【àn】其原始意义【yì】，就【jiù】是指愈伤【shāng】组【zǔ】织培养。但发展至今，其范【fàn】围【wéi】日益扩大，已包括植物【wù】和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离【lí】体无菌培【péi】养。因此，拥有几种不同【tóng】水平的培养技术，即整体的、器【qì】官的、组织的、细胞的和【hé】原【yuán】生质的培【péi】养【yǎng】技术。

本实验选择豌豆为【wéi】材【cái】料，豌豆(Pisumsativum)属豆科【kē】植物【wù】，是粮食【shí】、饲料和重要的蔬菜作物【wù】，也是遗【yí】传学家和植物生理学家感兴趣【qù】和乐于采【cǎi】用的实验植物，豌豆的根、茎【jīng】、子叶【yè】、下胚轴、上胚【pēi】轴、花芽等外植【zhí】体，皆可形成愈伤组织【zhī】，其【qí】中茎尖【jiān】、幼胚、幼叶等【děng】器官可成功的【de】再生成植株。茎【jīng】尖培养可包括【kuò】小至十几微米的茎【jīng】尖分【fèn】生组织【zhī】(生长点)和【hé】大至几十毫米的【de】茎尖或更大的【de】芽培【péi】养。在实【shí】践应用上，常采用【yòng】生【shēng】长【zhǎng】点的培养使患病植物【wù】去【qù】病毒，以达【dá】到挽救优良品种【zhǒng】，提【tí】高产【chǎn】量和质量之目的。

三、实验材料

仪器设备：

1. 酒精灯、三角烧瓶，培养皿。

2. 镊子、剪刀、剖针。

3. 双筒解剖显微镜。

4. 光照培养箱或温室。

5. 材料烟草无菌苗、豌豆幼苗。

试剂：

1. MS培养基，植物激素：NAA、6-BA等。

2. 饱和漂液(次氯酸钠)。

3. 70%酒精、100%酒精、酒精棉球。

4. 无菌水。

四、实验步骤

豌豆苗的茎尖培养：

1、取发芽6天的豌豆幼苗10株，简取1厘米左右的茎【jīng】尖，浸入70%的酒精中【zhōng】1分钟【zhōng】，再【zài】浸入【rù】饱和次【cì】氯【lǜ】酸【suān】钠溶液中消【xiāo】毒15分钟，(此步【bù】以后要求无菌)用无菌水中【zhōng】冲洗5次，在灭【miè】菌【jun1】的【de】滤【lǜ】纸【zhǐ】上吸干水分，放入灭菌【jun1】的培养【yǎng】皿中。

2、在双目解【jiě】剖镜下，用【yòng】灭菌的解剖【pōu】针【zhēn】剥【bāo】去幼叶露出生长锥，用【yòng】灭菌的【de】解剖针挑取带着两至三个叶原基【jī】的生长锥。

3、将挑好的茎尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-苄基腺嘌【piào】呤【lìng】(6-BA)的培养基上诱导愈【yù】伤【shāng】组织形【xíng】成，用封【fēng】口膜将培养皿【mǐn】封好。

4、在恒温培【péi】养箱中，26℃下,培养六周【zhōu】，形【xíng】成愈伤组【zǔ】织【zhī】，经继代后，可用于生根培养。