温育是ELISA测定中影【yǐng】响测定成败最为关【guān】键的【de】一【yī】个因素。ELISA作为一种固相免疫【yì】测定，抗原抗【kàng】体的【de】结合反应在固相上进行，要使液相【xiàng】中的抗原【yuán】或抗体与固相【xiàng】上的特异抗体或抗原结合，必须在一定的温度条件【jiàn】下反应一【yī】定的时间。温育所需时间与温度【dù】成反【fǎn】比，即温度越【yuè】高，则所【suǒ】需时间相对较【jiào】短。最为常用的【de】温育温度【dù】有37℃和室温，其次是【shì】43℃和2～8℃。

因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：

1、要保证在设定的温度下有足够的反应时间。

一【yī】般来【lái】说，加完【wán】样本和/或反应试剂【jì】后，将微孔板从室温拿至水【shuǐ】浴箱或温箱中【zhōng】时，孔内温度从室温【wēn】升至37℃，需要一定的时间，尤其是在室温比较低【dī】以及【jí】非水【shuǐ】浴【yù】的状态下【xià】，这段升温时间可能还比较长，而在【zài】临床实验室中【zhōng】，很少有人注意这个【gè】问题【tí】，通常是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就很容【róng】易造成实际【jì】测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题【tí】。曾【céng】有一地处南方的血站同行提出【chū】了【le】一个【gè】问题【tí】，就是在【zài】每一【yī】年【nián】的冬【dōng】季总有那么一个多月的时间，在做HBsAg测【cè】定的室内质【zhì】控中，测定由【yóu】卫生部【bù】临床检验中【zhōng】心供【gòng】应【yīng】的1 ng/ml弱【ruò】阳【yáng】性样本【běn】时，总是测不出来，不【bú】知原因为何？这可能就与南方【fāng】冬【dōng】天室内温度【dù】较【jiào】低有【yǒu】关，此时微孔板【bǎn】转【zhuǎn】入温箱后37℃温育时【shí】间不够，以致弱【ruò】阳性【xìng】样本【běn】测定为阴性。因【yīn】此，为保【bǎo】证37℃下【xià】足够的温育时间，临【lín】床实验室可自行确定本实验室【shì】不同季节【jiē】（不【bú】同室温下【xià】）微孔板【bǎn】从室温拿至温箱后需要多长时间【jiān】孔内温度才能达【dá】到37℃，从而适当【dāng】延长【zhǎng】板条在温箱中的放置时间。具体的做【zuò】法是【shì】，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。 

2、边缘效应"的排除。

以前【qián】在使用96孔板的ELISA测定【dìng】中，常【cháng】发【fā】现有“边缘效应【yīng】"，即外周【zhōu】孔显色较中心孔深，产生这种“边缘效应【yīng】"的原因可能为96孔板周孔【kǒng】与中心【xīn】孔【kǒng】表【biǎo】面或热力学特征的不同。但有研究证实【shí】在温育中【zhōng】的【de】热力【lì】学【xué】梯度可能【néng】是根本【běn】原因之所【suǒ】。聚苯乙【yǐ】烯本身为不良热导【dǎo】体，在实验【yàn】室【shì】的常规ELISA测定中，将【jiāng】板【bǎn】从室温（通常【cháng】在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时【shí】，在外周孔与【yǔ】中心孔之【zhī】间可【kě】能存在一【yī】热【rè】力学【xué】梯度。因此使用【yòng】水浴或在将反【fǎn】应溶液【yè】加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容【róng】易地【dì】排除“边缘效应"，并且可提高测定的重【chóng】复性。

总而言之，在临床ELISA测定中，要保证好【hǎo】的测定【dìng】效果，可采用【yòng】下述简单办法来确保温育【yù】条件，即【jí】尽量【liàng】采用【yòng】水【shuǐ】浴，温育中让微孔板浮【fú】于水面上，或将【jiāng】浸透【tòu】水【shuǐ】的沙布放入一大【dà】饭盒【hé】中成一【yī】湿盒，放于温箱中，这样就会因为板条孔底【dǐ】部直接与37℃水或湿布【bù】的接触，以及【jí】水浴箱或湿盒【hé】内的高温度，而【ér】使反应溶【róng】液【yè】的【de】温度迅速与温室平衡。