为了保证ELISA试剂盒试验的稳定及顺利完成，下面给大家【jiā】讲解使用【yòng】洗板【bǎn】机洗【xǐ】板时应注【zhù】意以下【xià】三【sān】个步骤。

1、洗涤参数

主要的参数【shù】是洗涤量。自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前遭遇过【guò】高背景，那么不【bú】要犹豫，将洗【xǐ】涤【dí】量调为高【gāo】，比【bǐ】包被体【tǐ】积【jī】更高【gāo】。太少的洗涤液【yè】会让一部【bù】分分析表面洗涤不到，从【cóng】而【ér】明显【xiǎn】增【zēng】加【jiā】背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。

ELISA试剂盒的使用手册中列【liè】出包被量。我们建议使【shǐ】用350µl洗【xǐ】涤液【yè】进行洗涤，以便清【qīng】洁整个反应孔的壁【bì】。一般来说【shuō】，洗涤量越高，则【zé】孵【fū】育步【bù】骤残【cán】留的抗体或抗【kàng】原量【liàng】就越少。

2、洗涤次数

影响【xiǎng】洗涤效【xiào】果的主要参数是洗涤循环的量。当然【rán】，洗涤次【cì】数【shù】越【yuè】多【duō】，背景越低。然【rán】而【ér】，太多次的洗涤会降低【dī】信号【hào】强度，使其难以测【cè】定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵【fū】育后重复洗涤三次。不过【guò】，一般而言，包被平【píng】板需【xū】要【yào】的洗涤次数比用户包被的平【píng】板【bǎn】要少。对于用户包【bāo】被的ELISA板，必须优【yōu】化洗涤次数【shù】。

控【kòng】制洗涤量和洗涤次数的【de】另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说，96孔板的每个孔能容纳330至460 µl。不过，有些自【zì】动化洗板机可设置【zhì】程序，分配远远【yuǎn】超【chāo】出这【zhè】个【gè】量的洗涤【dí】液【yè】，比如1 ml。它是【shì】如何做到的【de】呢【ne】？其实很【hěn】简单【dān】，就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说【shuō】，随着【zhe】分液器【qì】分配更多的液【yè】体【tǐ】，抽吸器也将液体吸出。这种技【jì】术能增加洗涤【dí】量，但不【bú】会溢【yì】出到其【qí】他孔中。

3、抽 吸

还有【yǒu】一些参【cān】数会影【yǐng】响洗涤步骤的【de】效果。这【zhè】些参数包括吸液高度和吸入位置，这两者都能调【diào】整，以降【jiàng】低背【bèi】景（残留量）和差【chà】异。

残【cán】留液体【tǐ】中【zhōng】包含未结合的抗原【yuán】或抗体，它们会增【zēng】加背景信号【hào】。残留量越小，残留液体越少，转移到下一【yī】步【bù】的【de】干扰液体也【yě】就越少【shǎo】。

吸液高【gāo】度会明显影【yǐng】响残留【liú】量；如果洗【xǐ】涤【dí】吸【xī】头与反应孔【kǒng】底【dǐ】部的【de】距离稍大，那就会【huì】让残留量急剧增加。反之【zhī】，如果洗涤吸头压着【zhe】反应孔底部【bù】，那么也会使吸液【yè】效率降低，残留量增加。

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