酶联生【shēng】物免疫学【xué】检验的各【gè】领域中【zhōng】的ELISA试剂盒【hé】，有着灵【líng】敏度高、特异性强、经济【jì】性较好等优点【diǎn】，酶联生物的ELISA试剂盒在所有【yǒu】产品中销量是高的，本公司【sī】ELISA试剂盒仅用于【yú】科研，不用于临床。在实验过程中肯【kěn】定会【huì】有很【hěn】多科研朋友是不懂的，今天【tiān】就给【gěi】大家介绍一下ELISA试剂盒的【de】使用【yòng】方法【fǎ】。

一：实验操作程序简述

1. 准备试剂，样品和标准品；

2. 加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟；

3. 洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟；

4. 加入终止液；

5. 15分钟之内度OD值；

二：包被的条件

包被用抗原或抗体的浓度【dù】，包被的【de】温度和时间，包被液的pH等【děng】应根据试验的特点和材【cái】料【liào】的性质【zhì】而选定。ELISA试剂盒【hé】抗体和蛋白质抗原一般采【cǎi】用pH9.6的碳酸盐缓冲液【yè】作为稀释液，也有用pH7.2的磷【lín】酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓【huǎn】冲【chōng】液作【zuò】为【wéi】稀释液的。

通常在ELISA板孔中加入包被液【yè】后【hòu】，在9-21℃冰箱中放置放【fàng】置一个晚上，37℃中保温2小时被认为具【jù】有同等的【de】包被效【xiào】果。包被的适当浓度随载【zǎi】体和包被物【wù】的性【xìng】质可【kě】有很大的变化，每批材料【liào】需通过实验与酶结合物【wù】的浓度协【xié】调选定【dìng】。一般【bān】蛋白质的【de】包被【bèi】浓【nóng】度为【wéi】100ng/ml-20ug/ml。

三：竞争法测抗原

小【xiǎo】分子抗原【yuán】或半抗【kàng】原【yuán】因缺乏可【kě】作夹心法【fǎ】的两个【gè】以上的位【wèi】点，因此不能用双抗体夹心【xīn】法进行测定，可以采用竞争【zhēng】法模式。其原理是【shì】标本中的抗【kàng】原和一定量的酶标抗原竞争与固【gù】相抗体结【jié】合。标本中【zhōng】抗原【yuán】量含量【liàng】愈多，结合【hé】在【zài】固相上的酶标抗原愈少，zui后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

四：抗原和抗体

制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与酶联结时其他杂【zá】蛋白的干扰。用【yòng】亲和【hé】层析纯的抗【kàng】体，这样全部酶结合物均具【jù】有特异的免疫活【huó】性，可以在高稀释度进【jìn】行反【fǎn】应【yīng】，实验结果【guǒ】本【běn】底浅淡。如用F(ab')2进行【háng】标【biāo】记，则更可避【bì】免标本中【zhōng】RF的干扰【rǎo】。

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