在ELISA试剂盒中一【yī】般有两次抗原抗【kàng】体反响，即【jí】加标本和加酶结合物后，抗原抗体反响的【de】完结需求【qiú】有一【yī】定的温度【dù】和时刻【kè】，这一保温【wēn】进【jìn】程【chéng】称为温育，有人称之为【wéi】孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。

1. 为什么ELISA反响总是需求一定时刻的温育？

ELISA属固相免疫测定，抗原【yuán】、抗体的结合【hé】只在固相表面上发生，以抗体【tǐ】包被的夹心法为例，加入板【bǎn】孔中的【de】标本，其间的【de】抗【kàng】原并不是【shì】都有平等的和固【gù】相抗结合的时【shí】机【jī】，只【zhī】有贴近【jìn】孔【kǒng】壁【bì】的一层溶液中的抗原直接与抗体接触，这【zhè】是一个【gè】逐【zhú】步平衡的进程，因而需经扩【kuò】散才能【néng】到达反响的结尾。在这以后加入的【de】酶标记抗体与固相抗原的【de】结合也同样【yàng】如【rú】此。

2. 温育常选用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。

37℃是实【shí】验室【shì】中【zhōng】常用的【de】保温温【wēn】度，也是大多数抗原【yuán】抗【kàng】体【tǐ】结合【hé】的适宜温度，在建立ELISA方法作反响【xiǎng】动力学研究时【shí】，实【shí】验表明【míng】，两次抗原抗【kàng】体反响一【yī】般【bān】在37℃经1～2小时，产【chǎn】品的【de】可达高峰。为加快反响，可进步反响的温【wēn】度，有【yǒu】些【xiē】实验在43℃进行，但不宜选【xuǎn】用更高的温度。抗原【yuán】抗体反响4℃更为，在放射免疫测定中多使【shǐ】反响在冰箱中过夜，以构成【chéng】多的沉淀。但因所需时刻太长，在【zài】ELISA试剂盒中【zhōng】一般不予【yǔ】选用。

ELISA试剂盒保【bǎo】温【wēn】的【de】方式除有的ELISA仪【yí】器【qì】附有【yǒu】特制的【de】电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA试剂盒板置于【yú】水浴箱中【zhōng】，ELISA板底【dǐ】应贴着水【shuǐ】面，使温度敏捷【jié】平衡。为防止蒸腾，板上【shàng】应加【jiā】盖，也可用塑料贴【tiē】封【fēng】纸【zhǐ】或保【bǎo】鲜膜覆盖板孔，此时【shí】可让反响板漂浮在水【shuǐ】面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应【yīng】放在湿盒内，湿盒要选用【yòng】传热【rè】性良好【hǎo】的资料如金属等，在【zài】盒底垫湿的纱【shā】布，后将ELISA板放在湿纱【shā】布上。湿盒应先放在保温箱中预【yù】温至规则【zé】的温度，特【tè】别是【shì】在气温较低的时候更应如此。

无论是水浴仍是湿【shī】盒温【wēn】育，反响板均不宜叠放，以确【què】保各板的温度【dù】都能敏捷平衡。室温温育的反响，操作【zuò】时的室温【wēn】应严厉限制【zhì】在规则的范【fàn】围【wéi】内，规【guī】范室温【wēn】温度是【shì】指20～25℃，但具体操作时可根【gēn】据说【shuō】明书的【de】要求【qiú】控制温育。室温温【wēn】育时，ELISA试剂盒【hé】只需平置于操【cāo】作台【tái】上即可【kě】。应留意温育的温度和时刻应按规则力求准确。为确保这【zhè】一点，一个人【rén】操作时，一次不【bú】宜多【duō】于两块板一【yī】起测定【dìng】。