中国仓鼠卵巢细胞（CHO/DHFR）

中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)
细胞介绍
该【gāi】细胞为二【èr】氢叶【yè】酸还原酶缺陷【xiàn】细胞。在没有HT (胸腺嘧啶）时细【xì】胞会【huì】死亡。细胞【bāo】培液中加氨甲喋呤可以防止对药物【wù】低抗性【xìng】的回变细胞的生长。
 
细胞特性
1)来源：中国仓鼠
2)形态：贴壁生长时，呈上皮细胞样。
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装运输和【hé】保存：可选择【zé】干【gàn】冰【bīng】运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输【shū】，收到后立即转入液氮【dàn】冻存或直接复苏【sū】；（2)存活细胞【bāo】，收【shōu】到后应继续生长【zhǎng】，传【chuán】代达【dá】到细胞生长状【zhuàng】态良好时，再进行冻【dòng】存。具体操【cāo】作见细【xì】胞培养步骤。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备IMDM培养基(GIBCO);胎牛血清，15%，双【shuāng】抗1%;用于【yú】表达【dá】蛋白时，也可【kě】使用悬浮培养基，使细胞悬浮生长。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿度【dù】为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴中迅【xùn】速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基【jī】混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】基【jī】后吹匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入培养瓶【píng】中【zhōng】培养过夜（或将
细胞【bāo】悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养【yǎng】基，培养过【guò】夜）。第二【èr】天换液并【bìng】检查细胞密度。
2.细胞传代【dài】：如果细胞密度【dù】达【dá】80%-90%，即可进行传代【dài】培养【yǎng】。对于贴壁细胞，传代可参【cān】考【kǎo】以【yǐ】下方法：弃去【qù】培养【yǎng】上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细【xì】胞9-21次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱【xiāng】中消【xiāo】化9-21分【fèn】钟，然后【hòu】在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况，若细胞大部【bù】分变【biàn】圆并脱【tuō】落【luò】，迅速拿回操作【zuò】台【tái】，轻敲几下培【péi】养瓶后加少量培【péi】养基终止【zhǐ】按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的【de】含8ml培养基的新皿中或【huò】者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻【dòng】存【cún】时【shí】，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-21次后加入【rù】lml胰酶，细胞变圆脱落【luò】后，加【jiā】入2ml*培养基终止【zhǐ】消化，可【kě】使用血球计数板计数。1000RPM离心5分钟【zhōng】去掉上清。用血清【qīng】重【chóng】悬浮，加【jiā】DMSO至【zhì】终浓度为10%。加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的数量分配到冻【dòng】存管中，注意冻管【guǎn】做【zuò】好标识。本公司按每个冻存【cún】管细胞数目大于1X106个细胞冻存。将冻【dòng】存管【guǎn】置【zhì】于【yú】程序降温盒中，放入-80度冰【bīng】箱，至少2个小【xiǎo】时以后转入【rù】液氮灌【guàn】储存。记录【lù】冻存管位置以便下次【cì】拿取。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请立【lì】即【jí】与我们【men】电联。
所有动物【wù】细胞均【jun1】视为有潜【qián】在的生物危害性，必须在二级【jí】生物安全台内操【cāo】作，并请注意防护【hù】，所有废液及接触过此【cǐ】细【xì】胞的器皿需要【yào】灭【miè】菌后方【fāng】能【néng】丢弃。