犬肾细胞系/ 野生型（MDCK）

犬肾细胞系/ 野生型(MDCK)
细胞介绍：
该【gāi】细胞【bāo】系【xì】源自一只雌性英国可卡【kǎ】犬的肾脏组织，由S.H. Madinand N.B. Darby于【yú】1958年建立。该细胞为【wéi】角【jiǎo】蛋白阳性细胞。
 
细胞特性：
1)来源：狗肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在【zài】显【xiǎn】微镜下确【què】认细胞生长状【zhuàng】态，去【qù】掉封口膜【mó】并将T25瓶置于37°C培【péi】养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细【xì】胞长满（90%以【yǐ】上）请【qǐng】及【jí】时进行细【xì】胞传代，传代培养用6ml本公【gōng】司附带的【de】*培养基。
5.接到细胞【bāo】次日，请检查细胞是否污染，若【ruò】发现污染【rǎn】或疑【yí】似污【wū】染，请及时与我【wǒ】们取得【dé】电联。
 
犬肾细胞系/ 野生型(MDCK)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEM a培养基(MEM a，GIBCO)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温度：37°C，培养箱湿【shī】度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅【xùn】速放入37°C水浴中（水面要低【dī】于冻存管盖部【bù】）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养【yǎng】基【jī】的15ml离心管中混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液【yè】，加入lmL培养基【jī】后吹【chuī】匀。然后【hòu】将所有细胞悬【xuán】液【yè】移入含【hán】有【yǒu】5ml培养基【jī】的培养瓶【píng】中培养【yǎng】过夜。第二【èr】天换液并检查细胞密度。细胞传代【dài】：如果细胞密度达80%-90%，即可【kě】进【jìn】行传代【dài】培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去【qù】培【péi】养上清，用【yòng】不含钙、镁【měi】离子的PBS润【rùn】洗细胞【bāo】9-21次。力口 2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加入3ml此细胞【bāo】的培【péi】养【yǎng】基终【zhōng】止消化。轻轻吹打后吸出【chū】，移入15ml离心管【guǎn】中【zhōng】，在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清【qīng】液，加【jiā】入lmL培【péi】养液后吹匀。
移入到事先准备好的含有5ml培养基的【de】T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养【yǎng】。细胞【bāo】冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时，可进行细【xì】胞冻【dòng】存。贴壁细【xì】胞冻存时，先要消化处理并进行【háng】细【xì】胞【bāo】计数。消化方法按照【zhào】细胞传代方的9-21步骤进行，后的【de】重悬液使用血【xuè】清【qīng】。悬浮细胞直【zhí】接计数后离心，用血清重【chóng】悬浮，加【jiā】DMSO至终浓度【dù】为10%。加【jiā】入DMSO后【hòu】迅速混【hún】匀【yún】，按每lml的【de】数量分【fèn】配到冻存管中。本公【gōng】司按每个【gè】冻【dòng】存管细胞数【shù】目大于1X106个细【xì】胞冻存。
 
犬肾细胞系/ 野生型(MDCK)注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥发干净【jìng】、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损【sǔn】及细【xì】胞有污染，请【qǐng】立即与我们【men】电联【lián】。
所有动【dòng】物细胞【bāo】均视为有【yǒu】潜在的生物危害性【xìng】，必须在二级生物安全台【tái】内操作，并请【qǐng】注【zhù】意防护，所有废液及接触过此【cǐ】细胞【bāo】的器【qì】皿【mǐn】需要【yào】灭菌后方能丢弃。