人恶性黑色素瘤细胞（MeWo）

人恶性黑色素瘤细胞(MeWo)
细胞特性
1)来源：黑色素瘤
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使【shǐ】用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收【shōu】到细胞后，可在【zài】1000RPM，常温条件【jiàn】下【xià】，离心5min后，于【yú】洁净操【cāo】作台弃去上清，加入推荐使用的【de】培养基后【hòu】转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者【zhě】T25培养【yǎng】瓶中培养，传代达到细胞【bāo】生【shēng】长状态良好时，再进行【háng】冻存。具体【tǐ】操作见细【xì】胞培养步骤。
 
人恶性黑色素瘤细胞(MeWo)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠【nà】O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度【dù】：37摄氏度【dù】，培养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解【jiě】冻，加入4mL培【péi】养基【jī】混合均【jun1】匀。在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将所有【yǒu】细胞悬【xuán】液【yè】加入培【péi】养瓶中培养过夜（或将
细胞悬液【yè】加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养【yǎng】基，培养过【guò】夜【yè】）。第二天换液【yè】并检查【chá】细胞密度。
 
细胞传代：如【rú】果细【xì】胞密度【dù】达【dá】80%-90%，即可进【jìn】行传代培养【yǎng】。对于贴壁细胞【bāo】，传代可参【cān】考以下方【fāng】法：弃去【qù】培【péi】养上清【qīng】，用不含钙【gài】、镁【měi】离子的PBS润洗细【xì】胞9-21次【cì】。力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-21分【fèn】钟，然后【hòu】在显微镜下观察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下【xià】培养瓶后加少量培养基终止消化【huà】。
按6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基【jī】，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后【hòu】吹匀。
将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新【xīn】的含8ml培【péi】养基的新皿中或【huò】者细胞冻存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞【bāo】冻【dòng】存时，弃去【qù】培养基后加入【rù】少量胰酶，细【xì】胞变圆【yuán】脱落【luò】后，加入约lml含血清【qīng】的培【péi】养基后加入存管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
人恶性黑色素瘤细胞(MeWo)注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶【píng】盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污染，请立【lì】即与我【wǒ】们【men】电联。
所有动物细胞均视为有【yǒu】潜在【zài】的生【shēng】物危害性，必须在二级生物安【ān】全台内操作，并【bìng】请【qǐng】注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此细胞【bāo】的【de】器皿需要灭【miè】菌后方能【néng】丢弃【qì】。