人结肠腺癌细胞（COLO-320）

人结肠腺癌细胞(COLO-320)
细胞介绍：
该细胞能合成复合胺，肾上腺素。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八【bā】, D-葡萄糖2.5g八，丙【bǐng】酮【tóng】酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛血清，10%。或DMEM 培养基(GIBCO,添加 NaHC031.5g八)，90%;胎【tāi】牛血清【qīng】，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏【shì】度【dù】，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞【bāo】：将含【hán】有lmL细胞【bāo】悬液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基混合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬液【yè】加入培养瓶【píng】中培养【yǎng】过【guò】夜（或将【jiāng】细胞悬液加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天换液【yè】并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠腺癌细胞(COLO-320)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下【xià】观【guān】察细胞【bāo】消【xiāo】化情况，若细胞【bāo】大部分变【biàn】圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下【xià】培【péi】养【yǎng】瓶后加少量培养基终止【zhǐ】消【xiāo】化。按【àn】6-8ml/瓶补加【jiā】培养【yǎng】基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分【fèn】 钟，弃【qì】去上【shàng】清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培【péi】养基的新【xīn】皿中或者 瓶中。
 
细胞冻存：待【dài】细【xì】胞生长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻【dòng】存。贴壁【bì】细胞冻存时【shí】，弃 去培养基后【hòu】加入少量胰酶，细【xì】胞变【biàn】圆脱【tuō】落后，加入约lml含血清的培养基后【hòu】加入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后【hòu】进行【háng】冻存【cún】。
 
注意事项：
收到【dào】细【xì】胞后，若发现【xiàn】干【gàn】冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立 即【jí】与我们【men】电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物【wù】危害性，必【bì】须在二级【jí】生【shēng】物安【ān】全台内操【cāo】作，并请注 意防护【hù】，所有废液【yè】及【jí】接【jiē】触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
人结肠腺癌细胞(COLO-320)细胞特性：
1)来源：人结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运【yùn】输和保存：使用含【hán】有胎牛血【xuè】清【qīng】的【de】2ml冻存管发【fā】送存【cún】活【huó】细胞。收【shōu】到细胞后， 可在1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净操作台弃【qì】去上清，加入推荐使用【yòng】的培【péi】养基后转移至l〇cm培【péi】养皿或者T75培养瓶中培养，传代达到【dào】细【xì】胞生长 状态良好时，再【zài】进【jìn】行冻【dòng】存。具体【tǐ】操作见细胞培养步骤。