狗肾细胞（MDCK（NBL-2）

狗肾细胞(MDCK(NBL-2)
细胞介绍
1958年九月S.H. Madin and N.B. Darby从一只【zhī】外观正常的【de】成年雌性英国小猎【liè】犬的肾【shèn】分离等到MDCK细胞株。角蛋白免疫过氧化物酶染色呈阳性【xìng】。MDCK被用于研究0 -粥样蛋【dàn】白前体的【de】处理及其蛋【dàn】白【bái】水解【jiě】产物。
 
细胞特性
1)来源：狗肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在显微镜下【xià】确认细胞生【shēng】长状【zhuàng】态，去掉【diào】封口【kǒu】膜并将T25瓶置于37°C培养约【yuē】2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以上）请及【jí】时【shí】进行【háng】细胞传【chuán】代，传代【dài】培养【yǎng】用6ml本公司附带的*培养【yǎng】基。
5.接到【dào】细胞次日【rì】，请检查【chá】细胞是否【fǒu】污染【rǎn】，若发现【xiàn】污染或疑似污染，请及时【shí】与我们取得电联。细胞用【yòng】途：仅供【gòng】使用。
 
狗肾细胞(MDCK(NBL-2)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEM a培养【yǎng】基(MEM a，GIBCO)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气【qì】相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】迅【xùn】速放【fàng】入37°C水浴中【zhōng】（水面要低于【yú】冻存管【guǎn】盖部【bù】）摇晃【huǎng】解冻，移入事【shì】先准备好的【de】含有4mL培养【yǎng】基的【de】15ml离心【xīn】管中混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，加入lmL培养基后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬【xuán】液移入含有5ml培养基的【de】培【péi】养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细【xì】胞密【mì】度。
 
细胞传代：如果细【xì】胞【bāo】密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参【cān】考以下方法：弃【qì】去培养上清【qīng】，用【yòng】不【bú】含【hán】钙、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-21次。力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化9-21分钟，然【rán】后在显微【wēi】镜下【xià】观【guān】察细胞消化情况，若细胞大部分变【biàn】圆并【bìng】脱落【luò】，迅速拿回操作台，轻敲几下【xià】培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。轻【qīng】轻吹打【dǎ】后吸出，移入15ml离心管中，在【zài】1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分钟，弃【qì】去上清【qīng】液，加入【rù】lmL培养液后吹匀。移入【rù】到【dào】事先【xiān】准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中【zhōng】或含有【yǒu】14ml培养基的T-75培【péi】养瓶中培养。细胞冻存【cún】：待细胞生【shēng】长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞【bāo】冻存【cún】时，先【xiān】
要【yào】消化处理并进行细胞计数。消化方法【fǎ】按照细胞传【chuán】代方【fāng】法的【de】9-21步骤进行【háng】，后【hòu】的重悬液使用【yòng】血清。悬浮细【xì】胞【bāo】直接计数后离心，用血清重悬【xuán】浮【fú】，加DMSO至终浓度为10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻【dòng】存管细胞数目大【dà】于1X106个细【xì】胞冻存。
 
狗肾细胞(MDCK(NBL-2)注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后，若发现干冰【bīng】己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动物细【xì】胞均【jun1】视【shì】为有潜在的生物危【wēi】害性，必须在【zài】二级生物安全台内【nèi】操作，并请注意【yì】防护，所有废液及接触过此细【xì】胞的器【qì】皿需要【yào】灭菌后方能丢弃。