人结肠腺癌细胞 （CW-2）

人结肠腺癌细胞 (CW-2)
细胞介绍：
来源于结肠癌。CEA阳性，移植于裸鼠可成瘤。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。或DMEM 培【péi】养基(GIBCO,添加NaHC031.5g八)，90%;胎牛血清， 10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度【dù】：37摄【shè】氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液【yè】氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴【yù】中迅【xùn】速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基【jī】混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基【jī】后吹匀【yún】。然【rán】后将所有细【xì】胞悬液加【jiā】入【rù】培【péi】养瓶【píng】中培养过夜（或将 细胞悬【xuán】液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基，培养过夜）。第【dì】二天换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠腺癌细胞 (CW-2)
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润【rùn】洗细【xì】胞9-21次。力【lì】口【kǒu】2m丨消【xiāo】化【huà】液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化9-21分钟【zhōng】，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况，若细胞【bāo】大部【bù】分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加少量培养基终【zhōng】止消化。
按6-8ml/瓶【píng】补【bǔ】加培养基，轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分 钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀【yún】。将细胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到1: 5的【de】比【bǐ】例【lì】分到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中【zhōng】。
 
细胞【bāo】冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行细【xì】胞冻存。贴【tiē】壁【bì】细胞冻存时，弃【qì】去培养基【jī】后加入少量胰酶【méi】，细胞变圆脱落后，加【jiā】入约lml含血清的【de】培养【yǎng】基后加入冻【dòng】存管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己【jǐ】挥发【fā】干净、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破【pò】损及细胞有【yǒu】污染，请立【lì】即与我们电联。
所有动物【wù】细胞均视【shì】为有潜在的生【shēng】物【wù】危害性【xìng】，必须在二级【jí】生物安【ān】全台内操作，并【bìng】请注意防护【hù】，所有废液及接【jiē】触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠腺癌细胞 (CW-2)运输和保存：使【shǐ】用含有胎牛血清【qīng】的【de】2ml冻存管发送存活细胞。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常温条件下【xià】，离心5min后【hòu】，于洁净【jìng】操【cāo】作【zuò】台【tái】弃去上【shàng】清，加入推荐使用的【de】培【péi】养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿或【huò】者T25培养瓶中培【péi】养，传代达到细胞生长状态良【liáng】好【hǎo】时，再进【jìn】行【háng】冻存。具体操作见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。