大鼠肝癌细胞（RH-35）

大鼠肝癌细胞(RH-35)
细胞介绍
RH-35细胞【bāo】株源自由N-2feuorenyldiuctamid在【zài】雄性AxC大鼠中诱导【dǎo】的【de】可移植Reulier H-35肝癌。细胞较小，饥饿24小时【shí】可【kě】以【yǐ】使其同【tóng】步。
 
细胞特性
1)来源：大鼠，肝癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用【yòng】含有胎牛【niú】血清的2ml冻存【cún】管发送存活细胞。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常温【wēn】条件【jiàn】下，离心【xīn】5min后，于【yú】洁净操作台弃【qì】去上清，加【jiā】入推荐使用的培养【yǎng】基后转移至【zhì】l〇cm培养皿或者T75培【péi】养瓶中培养，传代【dài】达到细胞【bāo】生【shēng】长状态良好时，再进行冻存【cún】。具体操作见细胞【bāo】培养步骤。细【xì】胞用途：仅供使【shǐ】用【yòng】。
 
大鼠肝癌细胞(RH-35)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培养基(DMEM-H，GIBCO添加 NaHC031.5g/L)，90%;胎牛血清，10%。（DMEM 液体培【péi】养【yǎng】基：GIBCO，11995-065)。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度【dù】，培养箱【xiāng】湿度【dù】为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合【hé】均匀。在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将【jiāng】所【suǒ】有细胞悬液加【jiā】入培养【yǎng】瓶中【zhōng】培【péi】养过夜（或将
细胞悬【xuán】液【yè】加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查【chá】细【xì】胞密度。
 
细胞传代：
如果细胞密度【dù】达80%-90%，即可进行传代培【péi】养【yǎng】。对【duì】于贴壁细胞，传【chuán】代可参考以下【xià】方法：
弃【qì】去培养上清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗【xǐ】细胞【bāo】9-21次。力口 2m丨【shù】消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养【yǎng】箱中消化【huà】9-21分钟，然后【hòu】在【zài】显微镜下【xià】观察细胞消化【huà】情况，若细胞大部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后【hòu】加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀后吸出【chū】，在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养液后吹匀。
将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培养【yǎng】基的新【xīn】皿中【zhōng】或者【zhě】。
细胞冻存【cún】：待细胞生【shēng】长状【zhuàng】态良好时【shí】，可进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存【cún】时，弃去培养【yǎng】基【jī】后加入少量胰酶，细【xì】胞变【biàn】圆【yuán】脱落后，加入【rù】约lml含血清【qīng】的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
大鼠肝癌细胞(RH-35)注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干【gàn】净【jìng】、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损【sǔn】及细胞有污染，请立即与【yǔ】我们【men】电联。
所【suǒ】有动物【wù】细胞均视为【wéi】有潜在的【de】生物危【wēi】害【hài】性，必【bì】须在二级生物安全台内操作【zuò】，并【bìng】请注意防护，所有废液及接触过此细【xì】胞的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃，瓶中。