人甲状腺癌细胞 （B-CPAP）

人甲状腺癌细胞 (B-CPAP)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备人甲状腺【xiàn】癌细胞B-CPAP*培养【yǎng】基【jī】(配方(100ml): RPMI-1640 (lnvitrogen,11875093) 89 ml FBS (Biochrom, S4115) 10 ml NEAA(lnvitrogen, 11140)1 ml
2.培养【yǎng】条件：气【qì】相：空气，95%;二【èr】氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存【cún】管在37°C水【shuǐ】浴中迅【xùn】速摇【yáo】晃【huǎng】解冻，加【jiā】入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养【yǎng】过夜（或将细胞【bāo】悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培【péi】养过【guò】夜）。第二天换液并检 查【chá】细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人甲状腺癌细胞 (B-CPAP)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细【xì】胞【bāo】9-21次。力【lì】口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中化9-21分钟，然【rán】后在【zài】显微镜下观察细胞消化【huà】情况【kuàng】，若细胞大部 分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加【jiā】少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打匀后【hòu】吸【xī】出，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬【xuán】液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基【jī】的新皿中【zhōng】或者瓶中。
 
细胞冻存【cún】：待【dài】细胞生长状态良好【hǎo】时，可进行细胞冻【dòng】存【cún】。贴【tiē】壁细胞冻存【cún】时，弃去【qù】培养基后加【jiā】入【rù】少量胰酶，细【xì】胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的培养基后加【jiā】入冻【dòng】存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后，若发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶【píng】盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请立即与我们【men】电联【lián】。
所【suǒ】有动物细胞均视为有【yǒu】潜在的生物危害性，必须在二级生物【wù】安全【quán】台【tái】内操作【zuò】，并请注意防护，所有废液【yè】及接触过此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：甲状腺，甲状腺瘤
2)形态：纺锤状或圆形细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人甲状腺癌细胞 (B-CPAP)运输和保存：使【shǐ】用含有胎牛血【xuè】清【qīng】的2ml冻存管发送存活细胞。收到细【xì】胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件【jiàn】下，离心【xīn】5min后，于洁净【jìng】操【cāo】作台弃去上清【qīng】，加入【rù】推荐使用【yòng】的【de】培养基后转移至【zhì】l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养【yǎng】瓶中培养，传代达到细【xì】胞生【shēng】长状态良好时，再进行冻存。具体【tǐ】操作见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。