美洲四棱线虫PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：美洲四棱线虫PCR检测试剂盒

英文名称：Tetrameres americanaPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释【shì】液【yè】（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫【háo】升

产【chǎn】品说【shuō】明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反【fǎn】应的物质主要有五种即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，美洲四棱线虫PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引【yǐn】物与模板DNA互【hù】补的程【chéng】度【dù】。理【lǐ】论上，只要知【zhī】道【dào】任何一段模板DNA序【xù】列， 就能按其【qí】设【shè】计互补的【de】寡核苷酸【suān】链做引物，利用PCR就可将模【mó】板DNA在体外大【dà】量扩【kuò】增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定【dìng】条【tiáo】件下可扩增【zēng】长至10kb的【de】片段。

③引物【wù】碱基：G+C含量以9-21%为宜，G+C太少【shǎo】扩【kuò】增效果不佳，G+C过多【duō】易【yì】出【chū】现非特【tè】异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸【suān】的成【chéng】串【chuàn】排列。

④避免引物内部【bù】出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是【shì】3'端的互补，否则【zé】会形【xíng】成引物【wù】二聚【jù】体，产生非【fēi】特异的扩增条带。

⑤引【yǐn】物3'端的碱基，特【tè】别是末及倒数第二个【gè】碱基，应严格要求【qiú】配对，以避【bì】免因末【mò】端碱基不配【pèi】对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加【jiā】上合适的【de】酶切位点， 被扩增【zēng】的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分【fèn】析【xī】或【huò】分子克隆很有好处。

⑦引【yǐn】物的特异性【xìng】：引物应与核酸序【xù】列数据【jù】库的其它【tā】序列无明【míng】显同源性。

引物【wù】量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产【chǎn】生所需要的结果为好【hǎo】，引物浓【nóng】度偏高会引起错【cuò】配【pèi】和非特异【yì】性【xìng】扩增，且可增加【jiā】引物之间形【xíng】成二聚【jù】体的机会。