木丝霉PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：木丝霉PCR检测试剂盒

英文名称：Xylohypha bantaniaPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染色【sè】液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶解液（tD）                                  毫【háo】升

产品说【shuō】明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．片PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的【de】物质主要【yào】有五种即【jí】引物、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，木丝霉PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互【hù】补的程度。理论上，只要知道任【rèn】何一段模板DNA序列， 就能按【àn】其【qí】设计互【hù】补【bǔ】的寡核苷【gān】酸链做【zuò】引物，利用PCR就【jiù】可【kě】将模板DNA在体外大量扩【kuò】增。设【shè】计引物【wù】应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件【jiàn】下可扩【kuò】增长至10kb的【de】片段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含量以9-21%为宜【yí】，G+C太少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易【yì】出【chū】现【xiàn】非特异条带。ATGC*随机分【fèn】布，避免5个以【yǐ】上的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的成串【chuàn】排列【liè】。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间【jiān】互【hù】补【bǔ】，特【tè】别是3'端的【de】互补，否【fǒu】则会形成引物二聚体【tǐ】，产生【shēng】非特异的扩增条带。

⑤引物【wù】3'端的碱【jiǎn】基，特别是末【mò】及倒【dǎo】数第二个【gè】碱【jiǎn】基，应严格要求配对，以【yǐ】避免【miǎn】因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物【wù】中【zhōng】有【yǒu】或能加【jiā】上合适的酶切位点， 被【bèi】扩增的靶【bǎ】序【xù】列*有适宜的酶切位点， 这对酶切【qiē】分析或分子克隆很【hěn】有好处。

⑦引物的【de】特异性：引物【wù】应与核酸序【xù】列数据库的【de】其【qí】它序列无明显同源性。

引物量：每条引【yǐn】物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所【suǒ】需要的结果为好【hǎo】，引物【wù】浓度【dù】偏【piān】高会引【yǐn】起错配和非特【tè】异性扩增，且【qiě】可增加引物之间形成二聚体的【de】机会。