莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒

英文名称：Rickettsia mooseriPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫【háo】升

染色液（t B）                                 微【wēi】升【shēng】

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶【róng】解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物【wù】质主【zhǔ】要有五种即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，莫氏立克次氏体PCR检测试剂盒PCR 产物的特异【yì】性【xìng】取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只【zhī】要知道【dào】任【rèn】何一段模板DNA序【xù】列， 就能【néng】按其设计互补的寡核苷【gān】酸链【liàn】做引物，利用PCR就可将【jiāng】模板DNA在【zài】体外【wài】大量扩增。设计引【yǐn】物【wù】应遵循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定【dìng】条件下可扩增【zēng】长至【zhì】10kb的片段。

③引物碱【jiǎn】基【jī】：G+C含量【liàng】以【yǐ】9-21%为宜，G+C太少扩增效果不佳【jiā】，G+C过多易出现非特异条【tiáo】带。ATGC*随机分布，避免5个以上的【de】嘌呤或【huò】嘧啶核苷酸的【de】成【chéng】串排列。

④避免引物内【nèi】部出现【xiàn】二级结构，避免两条引物间互补，特别是【shì】3'端的【de】互补，否【fǒu】则会【huì】形成引物二聚体，产生非【fēi】特异的【de】扩增条带【dài】。

⑤引物3'端的碱【jiǎn】基，特别是末及【jí】倒数第【dì】二个碱基，应严格【gé】要【yào】求配对【duì】，以避免【miǎn】因末端碱基不配对而导致PCR失败【bài】。

⑥引物中有或能【néng】加【jiā】上合适的【de】酶切位点， 被扩增的【de】靶【bǎ】序【xù】列*有【yǒu】适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子【zǐ】克【kè】隆很有好【hǎo】处。

⑦引物的【de】特异性：引【yǐn】物应与核酸序列数【shù】据库的其【qí】它序列无明显【xiǎn】同源性【xìng】。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量产生【shēng】所需要【yào】的结果为好，引物浓度偏高会引起错【cuò】配和【hé】非特异性扩增，且可增【zēng】加引物之间形成【chéng】二【èr】聚体的【de】机会。