耐万古霉素肠球菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：耐万古霉素肠球菌PCR检测试剂盒

英【yīng】文名称：VancomycinResistant Enterococcus(VRE)PCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫【háo】升

染色液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序。

2．扩增温度和延伸温度。

3．反应时间。

4．循环次数。

5．PCR 反应液的配制。

6．PCR技术的基本原理。

7．PCR的反应动力学。

8．PCR扩增产物。

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主【zhǔ】要【yào】有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，耐万古霉素肠球菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特【tè】异性【xìng】取决于引物与模【mó】板DNA互补的程度。理【lǐ】论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计【jì】互补的寡核苷【gān】酸链做引物【wù】，利用PCR就可将【jiāng】模板DNA在体【tǐ】外大量扩【kuò】增。设【shè】计【jì】引【yǐn】物应遵【zūn】循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩增跨【kuà】度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条【tiáo】件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量【liàng】以9-21%为【wéi】宜【yí】，G+C太少扩增效果不佳【jiā】，G+C过多易【yì】出现非特异条带。ATGC*随机分【fèn】布，避免5个以上的嘌【piào】呤或【huò】嘧【mì】啶核苷【gān】酸的成串【chuàn】排列。

④避免【miǎn】引物内部出现二级结构，避免【miǎn】两条引物间【jiān】互补，特别是3'端的【de】互补，否则【zé】会形成引物二聚体，产【chǎn】生非特异的扩【kuò】增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒【dǎo】数【shù】第【dì】二【èr】个碱【jiǎn】基，应严格【gé】要【yào】求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失【shī】败。

⑥引物【wù】中有【yǒu】或能【néng】加上合适的酶【méi】切位点， 被扩增的靶序列【liè】*有【yǒu】适宜的酶【méi】切位点， 这对酶切【qiē】分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应【yīng】与核酸序【xù】列【liè】数据库的【de】其它序列无明【míng】显同源【yuán】性。

引物量：每条引物的浓【nóng】度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量【liàng】产生所需要的结果为【wéi】好，引物浓度偏高会【huì】引起错配和非特异【yì】性扩增【zēng】，且可增加引物【wù】之【zhī】间形成【chéng】二聚体的机会。