人喉癌细胞 （TU 686）

人喉癌细胞 (TU 686)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2.培【péi】养条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的【de】冻存管迅速放【fàng】入37°C水【shuǐ】浴中（水面要【yào】低于【yú】冻存管盖【gài】部）摇晃【huǎng】解冻，移入事先准备好的含【hán】有4mL培养基的【de】15ml离【lí】心管【guǎn】中混【hún】合【hé】均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清【qīng】液，加入lmL培【péi】 养基后吹【chuī】匀。然后将所有细【xì】胞悬液移入含有5ml培养【yǎng】基的培养瓶【píng】中培养过夜。 第二【èr】天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人喉癌细胞 (TU 686)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力【lì】口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-21分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观【guān】察细胞消化情况，若细胞大部【bù】分变圆并脱【tuō】落【luò】，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几【jǐ】下培养【yǎng】瓶后加入3ml此细【xì】胞的培养基终止【zhǐ】消化。轻轻吹打【dǎ】后吸出，移【yí】入15ml离【lí】心管中，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟， 弃去【qù】上清液，加入lmL培【péi】养液后吹匀。移【yí】入到事先【xiān】准备好的含有【yǒu】5ml培养基的T-25培养【yǎng】瓶中或含有14ml培【péi】养基的T-75培养瓶中培养【yǎng】。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行【háng】细胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存时，先【xiān】要消化处理并【bìng】进行细胞计【jì】数。消化【huà】方法按照细胞传【chuán】代方法的9-21步骤进【jìn】行，后【hòu】的【de】重悬液使用血清。悬浮细【xì】胞直【zhí】接计数后离【lí】心，用血清【qīng】重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓度为【wéi】10%。加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每【měi】lml的【de】数量分配到冻存【cún】管【guǎn】中【zhōng】。本公司按每个冻【dòng】存管细胞数目大【dà】于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若【ruò】发现干【gàn】冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破【pò】损及细胞有污染，请【qǐng】立即【jí】与我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为有【yǒu】潜在的生【shēng】物危害性，必须【xū】在二级生物安全台内操【cāo】作【zuò】，并请注【zhù】意防护，所有【yǒu】废液及接触过此细胞【bāo】的器【qì】皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：喉部
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人喉癌细胞 (TU 686)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在显微镜下确认细【xì】胞生长状态，去【qù】掉封口膜并【bìng】将【jiāng】T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长【zhǎng】满【mǎn】（90%以【yǐ】上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公【gōng】司附带的【de】*培养【yǎng】基。
5.接到细胞次日，请检查细【xì】胞是否污【wū】染，若【ruò】发【fā】现污染【rǎn】或【huò】疑似【sì】污染，请及时与我【wǒ】们取得电联。
细胞用途：仅供使用。