人正常前列腺基质永生化细胞 （WPMY-1）

人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)
细胞介绍：
通过一个pRSTV质料结构，用【yòng】SV40大T抗原对基质细胞【bāo】进行永生【shēng】化。肌成【chéng】纤【xiān】维基质【zhì】细胞株，WPMY-1与RWPE-1细胞一样，来源于【yú】同一张成人前列腺【xiàn】组【zǔ】织切【qiē】片的周围区域的基质细胞。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1.培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，95%;胎【tāi】牛血清，5%。
2.培养【yǎng】条件：气【qì】相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2.细胞处理：
1)复苏细胞：将含【hán】有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水【shuǐ】浴中（水【shuǐ】面要低于冻存管【guǎn】盖部【bù】）摇晃解冻，移【yí】入事先准【zhǔn】备【bèi】好【hǎo】的含有4mL培养基的15ml离【lí】心管【guǎn】中混合均【jun1】匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培 养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含【hán】有5ml培【péi】养基的培养瓶中培养过夜。第【dì】二天换液并检【jiǎn】查细胞【bāo】密度【dù】。
2)细胞传代：如【rú】果细胞密度达80%-90%，即可进行传代【dài】培养。
 
人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在【zài】显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加【jiā】入3ml此【cǐ】细【xì】胞的 培养基终止【zhǐ】消化。轻轻吹打后吸出【chū】，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上清液，加入lmL培养液【yè】后吹匀【yún】。移【yí】入到事先【xiān】准备好的含【hán】有5ml培养【yǎng】基的【de】T-25培【péi】养瓶中或含有【yǒu】14ml培养 基【jī】的T-75培【péi】养瓶中培养【yǎng】。
 
细【xì】胞冻【dòng】存：待细胞生长状态【tài】良好时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁【bì】细【xì】胞冻存时，先要消化处理并【bìng】进行细胞计数。消化方【fāng】法按照细胞【bāo】传代方法【fǎ】的9-21步骤进行，后的重【chóng】悬液使用血清【qīng】。悬【xuán】浮细胞直【zhí】接计数后离【lí】心，用血清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按【àn】每【měi】lml的数量分配【pèi】到冻存【cún】管中。本公司按每个冻存【cún】管细胞数目大于1X106个细胞冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若发【fā】现干【gàn】冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染【rǎn】，请立【lì】即【jí】与我【wǒ】们电联。
所有动物细【xì】胞均视为【wéi】有潜【qián】在的【de】生物危害【hài】性，必须【xū】在二【èr】级生物安全【quán】台内操作，并请注【zhù】意防护，所有废液及【jí】接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：前列腺
2)形态：成肌细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在【zài】显微镜下【xià】确认细胞生长状【zhuàng】态，去掉【diào】封口膜并将T25瓶【píng】置于37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果【guǒ】细胞长满（90%以【yǐ】上）请及时进行细胞传【chuán】代，传代培养【yǎng】用6ml本公司【sī】附 带的*培养基【jī】。
5.接到细胞次日，请检查细胞是【shì】否污【wū】染，若【ruò】发现污染或疑【yí】似【sì】污染，请及时与我 们取得电【diàn】联【lián】。
细胞用途：仅供使用。