人胚肺细胞 （WI-38）

人胚肺细胞 (WI-38)
细胞介绍：
WI-38人二倍【bèi】体细胞系来自3个月的正【zhèng】常胚胎肺【fèi】组织。该细胞系是首株用于人类疫苗【miáo】制【zhì】备的人二【èr】倍体细胞系。培养液【yè】中添加TNFalpha可以【yǐ】促进【jìn】细胞生【shēng】长【zhǎng】。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 MEM 培养【yǎng】基(MEM:GIBCO);北美胎牛血【xuè】清(United States， GIBCO )，10%; PS 1%。

2.培养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现【xiàn】配。液氮储存。z〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二【èr】天【tiān】换液并检查细胞【bāo】密【mì】度。
2.细胞传【chuán】代：如果细胞密度达80%-90%，即可【kě】进行传【chuán】代培养【yǎng】。
 
人胚肺细胞 (WI-38)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润洗细【xì】胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于【yú】37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并【bìng】脱落，迅速【sù】拿【ná】回操作【zuò】台，轻【qīng】敲几【jǐ】下【xià】培养【yǎng】瓶后加2ml*培养基 终【zhōng】止【zhǐ】消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹匀。将【jiāng】细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含【hán】8ml培【péi】养【yǎng】基的【de】新【xīn】皿中或【huò】者【zhě】瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细【xì】胞冻存时，弃去培养基后，PBS清【qīng】洗瓶底【dǐ】9-21次后加入【rù】lml胰酶，细【xì】胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可使用血【xuè】球【qiú】计数板【bǎn】计【jì】数。1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬【xuán】浮，加【jiā】DMSO至终浓度为10%。加【jiā】入DMSO后【hòu】迅速【sù】混匀，按每【měi】lml的数量分配到冻【dòng】存管【guǎn】中，注【zhù】意冻存管做好【hǎo】标识。本【běn】公司按【àn】每个冻存管细胞数【shù】目大于1X106个细胞冻存。将冻存管置于程序【xù】降【jiàng】温盒【hé】中【zhōng】，放入-80度冰箱【xiāng】，至少2个小【xiǎo】时以后【hòu】转入液氮灌储存【cún】。记录冻存【cún】管位置以便下次拿取。
 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破【pò】损及细胞有污染，请立即与【yǔ】我【wǒ】们电【diàn】联。
所有动【dòng】物细胞均视为有潜在的【de】生物危害性，必【bì】须在二级生物安全台【tái】内【nèi】操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器【qì】皿【mǐn】需要【yào】灭菌后【hòu】方能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：正常肺
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肺细胞 (WI-38)运【yùn】输和保存：使用含【hán】有胎牛血清的【de】2ml冻存管发【fā】送存【cún】活细【xì】胞。收【shōu】到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上清，加入推荐使用的培【péi】养基后转移至l〇cm培养皿或【huò】者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状【zhuàng】态良好时，再【zài】进行冻存【cún】。具【jù】体操作见【jiàn】细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。