神经外胚层肿瘤细胞（TC-71）

神经外胚层肿瘤细胞(TC-71)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧【yǎng】化碳，5%。温度【dù】：37°C，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液【yè】的冻存【cún】管迅速【sù】放入37°C水浴中（水面要低于【yú】冻存管盖部）摇晃解冻，移入事【shì】先准备好的含有4mL培养基【jī】的15ml离心管中混【hún】合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，加入lmL培养基后吹匀。然后将所有【yǒu】细胞【bāo】悬【xuán】液移【yí】入含有5ml培【péi】养基【jī】的培【péi】养瓶中培养过【guò】夜。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
神经外胚层肿瘤细胞(TC-71)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞【bāo】9-21次。力口【kǒu】2m丨【shù】消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-21分钟，然后在显微镜下【xià】观察细胞【bāo】消化【huà】情况，若细胞大部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加入3ml此细胞【bāo】的 培养基终止消化。轻轻吹打后【hòu】吸出【chū】，移入15ml离心【xīn】管【guǎn】中，在1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，加入lmL培【péi】养【yǎng】液后吹【chuī】匀【yún】。移入到事先【xiān】准备【bèi】好的含有5ml培养【yǎng】基的T-25培养瓶【píng】中【zhōng】或含有14ml培养基的T-75培【péi】养瓶中培【péi】养【yǎng】。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化【huà】方法按照细胞【bāo】传代方法的9-21步骤【zhòu】进行，后的重悬液使用【yòng】血清【qīng】。悬浮细胞直接【jiē】计数后离【lí】心，用血【xuè】清重悬【xuán】浮，加DMSO至终【zhōng】浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到【dào】冻【dòng】存【cún】管【guǎn】中【zhōng】。本公司【sī】按每个【gè】冻存管【guǎn】细胞数【shù】目【mù】大于1X106个【gè】细【xì】胞冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后【hòu】，若发现干【gàn】冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶【píng】盖【gài】脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请立即与【yǔ】我们电联。
所有动物【wù】细胞均视为有潜【qián】在的生物危害【hài】性，必须在二级生物【wù】安全【quán】台【tái】内操作，并请注意【yì】防护，所【suǒ】有废液及【jí】接触过此细胞的器皿需要灭【miè】菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：神经外胚层
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
神经外胚层肿瘤细胞(TC-71)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜【jìng】下确认细【xì】胞生长【zhǎng】状态，去掉封【fēng】口【kǒu】膜并将T25瓶置于37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长【zhǎng】满（90%以上【shàng】）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的*培养基。
5.接到细【xì】胞次日，请检查细胞是【shì】否【fǒu】污染，若发【fā】现污染或疑似污染，请及时【shí】与【yǔ】我【wǒ】们取得电联。
细胞用途：仅供使用。