大鼠肝细胞（BRL 3A）

大鼠肝细胞(BRL 3A)
细胞介绍
这个细胞株的无血清【qīng】条件培养【yǎng】基是MSA的一个来【lái】源【yuán】。MSA多肽家族能够部分满【mǎn】
足鸡胚成纤维细胞对血清的需求。
 
细胞特性
1)来源：小鼠肝
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
大鼠肝细胞(BRL 3A)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在【zài】显【xiǎn】微镜下确认【rèn】细胞生长【zhǎng】状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培【péi】养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长满（90%以【yǐ】上）请及时进行【háng】细胞传代【dài】，传代培养用6ml本公【gōng】司附【fù】带的*培养基【jī】。
5.接到细胞次日，请检查细【xì】胞是否污染【rǎn】，若【ruò】发【fā】现【xiàn】污染或【huò】疑似污染，请及时【shí】与我们取得电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM 培【péi】养基(DMEM，GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度【dù】：37°C，培养箱湿度【dù】为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细【xì】胞【bāo】：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存【cún】管迅【xùn】速放【fàng】入37°C水浴中（水【shuǐ】面要低于冻存管盖部）摇晃解冻【dòng】，移入事先准备好的含【hán】有【yǒu】4mL培养基的15ml离【lí】心管中混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，加【jiā】入lmL培养基后吹匀。然后【hòu】将所有细胞【bāo】悬液移【yí】入含有【yǒu】5ml培【péi】养基的培养瓶中培养过夜。第二天【tiān】换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-21次。力口 2m丨消化【huà】液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟【zhōng】，然后在显【xiǎn】微镜下观察【chá】细胞【bāo】消化情况【kuàng】，若细胞大部分变圆并【bìng】脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻【qīng】敲几下培【péi】养瓶后【hòu】加入3ml此细胞的培养【yǎng】基终止消化。轻轻【qīng】吹打后吸出，移入15ml离【lí】心管【guǎn】中，在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，加【jiā】入lmL培养液【yè】后吹匀。移入到事先【xiān】准备好【hǎo】的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或【huò】含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
细胞冻存：待细胞生长状态【tài】良【liáng】好时，可进行细【xì】胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时【shí】，先要消化处理并进【jìn】行细胞计【jì】数。消化方【fāng】法按照细胞【bāo】传代方法的【de】9-21步【bù】骤进行【háng】，后的重悬液使【shǐ】用血清。悬浮细【xì】胞【bāo】直【zhí】接计数后【hòu】离【lí】心，用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加【jiā】入DMSO后迅速【sù】混匀，按每lml的数【shù】量【liàng】分配到冻存管中。本公司按【àn】每个冻【dòng】存【cún】管细胞数目大于1X106个细胞冻【dòng】存。
 
大鼠肝细胞(BRL 3A)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发【fā】干【gàn】净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污染，请立即与我【wǒ】们电【diàn】联。所有动【dòng】物细胞均视为【wéi】有潜在的生物危害性，必【bì】须【xū】在二级生物安【ān】全台【tái】内【nèi】操作，并请【qǐng】注意防护，所有废【fèi】液【yè】及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭【miè】菌后方能丢弃。