人结直肠腺癌细胞（Caco-2）

人结直肠腺癌细胞(Caco-2)
细胞介绍：
这株【zhū】细胞分离自直肠【cháng】原【yuán】位【wèi】癌。当长到满【mǎn】时【shí】，细胞表【biǎo】现出特征性的【de】肠【cháng】上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维【wéi】甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋【dàn】白【bái】II，并呈角质【zhì】蛋白阳性。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备【bèi】MEM培养基（GIBCO,，80%;胎牛血清，20%。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养【yǎng】箱 湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴【yù】中迅速摇晃【huǎng】解冻，加【jiā】入4mL培养【yǎng】基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬液【yè】加【jiā】入培养瓶中培【péi】养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基【jī】，培【péi】养过夜）。第二【èr】天换液并检查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结直肠腺癌细胞(Caco-2)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若【ruò】细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲【qiāo】几【jǐ】下培养瓶【píng】后加少量培【péi】养【yǎng】基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后【hòu】吸出，在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。
 
细【xì】胞冻存：待【dài】细【xì】胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻存时【shí】，弃 去培养基【jī】后加入【rù】少量胰酶，细【xì】胞变圆【yuán】脱落后，加入约【yuē】lml含血清的【de】培养基后【hòu】加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行【háng】冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们【men】电联。
所有动【dòng】物细【xì】胞均【jun1】视为有潜在的生物危害性，必【bì】须在二级生物安全台内操作，并请【qǐng】注【zhù】意防【fáng】护【hù】，所有废液及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后【hòu】方【fāng】能丢弃瓶【píng】中。
 
细胞特性：
1)来源：结肠，结直肠腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结直肠腺癌细胞(Caco-2)运输和保存：可选择干冰运【yùn】输及发送复苏存活【huó】细胞方【fāng】式：（1)干【gàn】冰运输，收到后 立【lì】即转入【rù】液氮冻存【cún】或直接复苏；（2)存活细【xì】胞，收到【dào】后应继续【xù】生长【zhǎng】，传代达【dá】到【dào】细胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时，再进行【háng】冻存。具体操作见细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。