人胆管癌细胞（QBC-939）

人胆管癌细胞(QBC-939)
细胞介绍：
该细【xì】胞由第三【sān】军医大【dà】学西南医院建系于1997年【nián】，细胞来源于一位【wèi】接受了肝胆手术【shù】的【de】肝外【wài】胆管癌患者。
 
细胞特性
1)来源：肝外胆管肿瘤
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输【shū】和【hé】保存：使用【yòng】T25瓶充【chōng】液发送活细胞。收到细胞后，请先【xiān】在显微镜下【xià】检查细胞生长状【zhuàng】态【tài】，并将T25瓶置于培【péi】养箱约6h或过夜后，再次检查细胞状态【tài】。若【ruò】状态良【liáng】好，可【kě】按照以下【xià】细胞培养步【bù】骤进行细【xì】胞后续处理【lǐ】操作【zuò】。若发现可疑污染物，请及时【shí】与我们取得【dé】电联。细【xì】胞用途：仅供使【shǐ】用。
 
人胆管癌细胞(QBC-939)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
2.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC031.5g八,D-葡【pú】萄【táo】糖2.5g八，丙酮酸【suān】钠O.llg八)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。或准备DMEM培养【yǎng】基【jī】(GIBCO)，90%;胎牛【niú】血清，10%;双抗，1%。
3.培【péi】养条件：气【qì】相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
4.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储【chǔ】存。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加【jiā】入【rù】4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将【jiāng】所有细【xì】胞悬液【yè】加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过夜【yè】）。第二天【tiān】换液并检查细【xì】胞密【mì】度【dù】。
细胞传【chuán】代：如果细【xì】胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对【duì】于【yú】贴壁细胞，传代可参考以下【xià】方【fāng】法：
1.弃去培【péi】养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离【lí】子的PBS润洗细胞9-21次。
力口 2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然【rán】后在显微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若细胞大部分【fèn】变圆并脱【tuō】落，迅【xùn】速拿回操作【zuò】台，轻敲几下培养瓶【píng】后加【jiā】少量培养基终【zhōng】止消化。
按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打匀后【hòu】吸出【chū】，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清【qīng】液【yè】，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。将细【xì】胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿【mǐn】中或者瓶中【zhōng】。
 
细胞冻【dòng】存：待细胞生【shēng】长状【zhuàng】态良好【hǎo】时【shí】，可进行细胞冻【dòng】存【cún】。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃【qì】去培养【yǎng】基后加入少量胰酶【méi】，细胞【bāo】变圆脱落【luò】后，加入约lml含血【xuè】清的培养基后加入冻存【cún】管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
人胆管癌细胞(QBC-939)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰【bīng】己挥发干【gàn】净【jìng】、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞【bāo】有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有【yǒu】潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内【nèi】操作，并请【qǐng】注【zhù】意防护，所有废液及【jí】接触过【guò】此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后【hòu】方【fāng】能丢弃【qì】。