人非小细胞肺癌细胞（NCI-H358）

人非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)
细胞介绍：
1981年从一位开【kāi】始化疗之前【qián】的患【huàn】者的【de】肿瘤组织【zhī】中【zhōng】分离建株。超微结构【gòu】研【yán】究【jiū】表明细胞质中有Clara细胞【bāo】的特征结构。细胞表达主【zhǔ】要的肺表【biǎo】面结【jié】合蛋【dàn】白SP-A的蛋白和RNA，不表达SP-B和SP-C。
 
细胞特性
1)来源：细支气管及肺泡癌;非小细胞肺癌;肺;细支气管;肺泡
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保【bǎo】存：使用【yòng】含有胎牛【niú】血清【qīng】的2ml冻存管发送存活【huó】细【xì】胞。收【shōu】到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推【tuī】荐【jiàn】使用的培养基后转移至l〇cm培【péi】养皿【mǐn】或者【zhě】T25培养【yǎng】瓶中培【péi】养，传代【dài】达到细胞生长状态良好【hǎo】时，再进【jìn】行冻【dòng】存【cún】。具体操作【zuò】见细胞培养步骤。
 
人非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPMI-1640:GIBCO,)，90%;胎【tāi】牛【niú】血【xuè】清，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞【bāo】悬液的【de】冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解【jiě】冻，加【jiā】入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】过夜【yè】（或将
细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基，培养【yǎng】过夜【yè】）。第二天换液并【bìng】检【jiǎn】查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化【huà】9-21分钟【zhōng】，然后在【zài】显微镜下观察细【xì】胞消化情况，若细胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿【ná】操【cāo】作台【tái】，轻【qīng】敲几【jǐ】下培养瓶【píng】后加少量培养基终【zhōng】止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀【yún】。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中或者瓶中【zhōng】。细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时【shí】，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃【qì】去【qù】培养基后加入少【shǎo】量【liàng】胰酶，细【xì】胞【bāo】变圆脱落【luò】后，加入约lml含血【xuè】清的培养基【jī】后加【jiā】入冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。
 
人非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损【sǔn】及细胞有【yǒu】污【wū】染，请立即与我们【men】电联【lián】。
所有动物细胞均视为有潜【qián】在【zài】的生物【wù】危害性，必须在二级生物安全台内操作，并【bìng】请注意【yì】防护【hù】，所有废【fèi】液及接触过此【cǐ】细胞的器皿【mǐn】需要灭【miè】菌后【hòu】方能丢弃。