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人巨核细胞白血病细胞 (Dami)

人巨核细胞白血病细胞 (Dami)

产品时间:2024-9-21

简要描述:

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人巨核细胞白血病细胞 (Dami)
细胞介绍:
从【cóng】一个巨核【hé】细胞白血病【bìng】患【huàn】者的血液建立了一株新的人类巨核细胞(Dami)。此细【xì】胞悬浮生长为主,倍增时间【jiān】9-21小时【shí】。至少89%的细胞可与血小板糖蛋白(GP) lb and llb/NIa及血型糖蛋白单克【kè】隆抗体【tǐ】反应。不与【yǔ】抗淋【lín】巴【bā】腺【xiàn】、单核细【xì】胞、粒性白细 胞、巨噬细胞抗原的抗【kàng】体反应。Dami细胞为研【yán】究巨【jù】核细【xì】胞生化【huà】及分【fèn】化提供了极 好的模型。
 
细胞培养步骤:
1)培养基及培养冻存条件准备:
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八,丙酮【tóng】酸钠【nà】O.llg八),90%;胎牛血清,10%。
2.培养【yǎng】条件:气相:空气,95%;二氧【yǎng】化碳,5%。温【wēn】度:37摄氏度【dù】,培养箱【xiāng】湿【shī】度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液:90%*培养基,10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理:
复苏细胞:将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存【cún】管在37°C水【shuǐ】浴中迅速【sù】摇晃解【jiě】冻,加入4mL培【péi】养基混合均【jun1】匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加l-2mL培养基【jī】后吹【chuī】匀。然【rán】后将所有【yǒu】细【xì】胞悬液加入培养【yǎng】瓶【píng】中培养过夜【yè】(或将细胞悬液【yè】加【jiā】入l〇cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液【yè】并检【jiǎn】 查细胞密度。
细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
 
人巨核细胞白血病细胞 (Dami)对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中,置于37°C培养箱中消化9-21分钟,然后在显【xiǎn】微镜下观【guān】察细胞【bāo】消【xiāo】化情况,若【ruò】细胞【bāo】大【dà】部【bù】 分变圆并【bìng】脱落【luò】,迅速拿回【huí】操作台,轻敲【qiāo】几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养基【jī】,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离【lí】心4分钟,弃去【qù】上清液,补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。将细【xì】胞【bāo】悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的【de】含8ml培【péi】养基的【de】新【xīn】皿中或【huò】者瓶中。
 
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一【yī】:收集细胞,1000RPM条件下【xià】离心4分钟,弃去上【shàng】清液,补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养液【yè】后吹匀,将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分【fèn】到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中【zhōng】或者瓶中。
方法二:可【kě】选【xuǎn】择半数换液方式,弃去半【bàn】数培养基后,将剩【shèng】余细胞悬【xuán】起,将细胞悬液【yè】按【àn】1: 2到1: 3的比【bǐ】例分到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。
细【xì】胞冻存:待细胞生长状态良【liáng】好时,可进行细胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存时,弃去培养基后【hòu】加入【rù】少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入【rù】约lml含血【xuè】清的【de】培养【yǎng】基后加【jiā】入冻【dòng】存管中,再【zài】添【tiān】加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细【xì】胞【bāo】收集,1000RPM条件下【xià】离心4分钟,少量保【bǎo】存上清液(防止细胞吸走),加【jiā】入【rù】部【bù】分新鲜培养基【jī】,加入到冻存管中,在【zài】冻存管中加【jiā】入1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项:
收到【dào】细胞后,若发现干冰【bīng】己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及【jí】细胞有污染,请立即与【yǔ】我们电联。
所有【yǒu】动物细【xì】胞均视为有【yǒu】潜在【zài】的生【shēng】物危害性【xìng】,必须在二级生物安全台内【nèi】操作【zuò】,并请注意防护,所【suǒ】有废液及接触过此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢【diū】弃。
 
人巨核细胞白血病细胞 (Dami)细胞特性:
1)来源:巨核细胞白血病
2)形态:巨核细胞
3)含量:>lxl06 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和【hé】保存:可【kě】选择干冰运输及发【fā】送复苏【sū】存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液【yè】氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到【dào】后应【yīng】继续生【shēng】长,传【chuán】代【dài】达【dá】到细胞生长【zhǎng】状态良好时,再【zài】进行冻存【cún】。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供使用。
  

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